三种组织内源性生长因子含量变化与创面修复的关系
作者：付小兵 王亚平 孙同柱 杨银辉 郭振荣 许明火 高建川 盛志勇
单位：100037 北京，解放军第三○四医院
关键词：烧伤；表皮细胞生长因子；肿瘤坏死因子；一氧化氮
New Page 2
【摘要】目的：探讨喉粘膜上皮异型增生p53、H-ras过度表达与预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法对63例喉粘膜上皮异型增生(经随访其中40例恶变为癌)、56例喉鳞癌和7例喉正常组织进行检测。结果：p53蛋白阳性率在喉粘膜上皮异型增生恶变组为50.0%，未恶变组为17.4%，喉癌组为51.8%，正常组织无表达。恶变组与未恶变组间，未恶变组与喉癌组间的p53蛋白表达差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01)。H-ras蛋白阳性率在喉正常组织、异型增生恶变组、未恶变组、喉癌组依次为0%、52.5%、52.2%和73.2%。恶变组和未恶变组间H-ras表达差异无统计学意义。结论：p53蛋白的过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。H-ras的表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无关。
, 百拇医药
中图号：R739.65
The relationship between the overexpression of p53, H-ras
and the prognosis of laryngeal dysplasia
Xiang Mingliang1 Wu Yunfang1 Shi Daren2, et al
1.EENT Hospital, shanghai Medical University (Shanghai, 200031)
2.Tumor Hospital, Shanghai Medical University (Shanghai, 200032)
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: In order to determine whether prognosis of laryngeal dysplasia is related to expression of p53, H-ras. Method: The avidin biotin peroxidase method was used to detect the p53, H-ras protein in 63 cases of dysplasia (40 cases of whom developed into cancer after 4 years follow-up.), 56 squasmous cell carcinoma and 7 normal tissues. All samples were from larynx. Results: The results showed that the positive p53 staining rates was 50% in the malignant change group, 17.4% in the nonmalignant group, and 51.8% in cancer. No protein was found in normal tissues. The statistical significance was positive between the malignant change group and the nonmalignant group. The positive H-ras staining rates were 0% , 52.5% , 52.2% and 73.2% in nomal tissues, malignant change group, nonmalignant one and cancer, respectivly. There was no statistical difference between the malignant change group of dysplasia and the nonmalignant one. Conclusion: The study results indicate that the overexpression of p53 protein was closely related to the prognosis of laryngeal dysplasia.
, 百拇医药
Key words: p53 protein; Immunohistochemistry; Laryngeal mucosa Epithelium dysplasis; Prognosis
喉粘膜上皮异型增生为喉癌前病变，其中一部分最终发展为喉癌。然预后不同的喉粘膜上皮异型增生，在病理形态学上并无明显差异，若能客观准确地预测其预后，将可明显提高喉癌的早期诊断。
p53为一种抑癌基因，它的突变与许多肿瘤有关，在喉粘膜上皮异型增生和喉癌中亦可检测到其蛋白产物[1]。H-ras为常见的癌基因，与喉癌的发生可能有关[2]。国内外迄今尚未见到有关p53、H-ras与喉粘膜上皮异型增生预后关系的文献。
本研究采用免疫组化法检测p53、H-ras蛋白在喉粘膜上皮异型增生和癌组织中的表达水平，旨在探讨该二因子判断喉粘膜上皮异型增生预后的价值。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1材料
全部组织选自我院病理科1986年～1995年活检或手术标本组织蜡块。喉粘膜上皮异型增生的程度划分标准参照文献[3，4]所述，轻度：异型增生细胞局限于上皮层下1/3范围；中度：异型增生细胞局限于上皮层下2/3范围；重度：异型增生细胞已超过上皮层2/3范围，接近全层。按随访资料将喉粘膜上皮异型增生63例分为恶变组和未恶变组。恶变组标本系随访4年内发展为癌者，未恶变组标本为随访4年以上尚未恶变者。恶变组40例，含轻度粘膜上皮异型增生10例，中度异型增生20例，重度异型增生10例。未恶变组23例，含轻度异型增生8例，中度异型增生10例，重度异型增生5例。
喉鳞癌56例，按1987年UICC标准，Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ期12例，Ⅳ期16例。组织病理学分级：Ⅰ级20例，Ⅱ级29例，Ⅲ+Ⅳ级7例。另取7例喉正常组织做对照。以上标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋，病理确诊。
, 百拇医药
1.2检测方法
采用免疫组化ABC法染色。行p53蛋白检测的切片在上一抗前行微波处理。p53McAbDo-7和C-Ha-rasp21McAbNcc-ras-001均为丹麦DaKo公司产品，工作浓度分别为1∶50和1∶100。生物素化马抗鼠抗体及ABCKit为美国Vector公司产品。用已知阳性的喉鳞癌切片做阳性对照，TBS缓冲液替代一抗做空白对照。
1.3结果判断及统计方法
在不知道临床和病理资料的情况下，由两位有经验的病理医师分别观察结果。阳性细胞数<20个为(-)，占肿瘤细胞2%～24%为(+)，25%～50%为(++)，>50%为(+++)。
统计处理采用Epi Info Version5.0统计软件，方法为卡方检验。
2 结果
, 百拇医药
喉粘膜上皮异型增生和鳞癌中，p53阳性细胞为：胞核染成棕黄色，胞浆及胞膜不着色(见图1)。H-ras蛋白阳性细胞为：胞浆和胞膜染成棕黄色，胞核不着色(见图2)。
图1 部分异型增生上皮细胞p53核阳性(ABC免疫组化法.×400)
图2 异型增生上皮胞浆H-ras阳性染色(ABC免疫组化法.×100)
p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生中的阳性表达见表1。恶变组与未恶变组之间的阳性差异见表2。
, 百拇医药
表1 p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生中的阳性表达
组别
例数
p53阳性*
H-ras阳性
例数
%
例数
%
恶变组
40
20
, 百拇医药 50.0
21
52.5
未恶变组
23
4
17.4
12
52.2
*χ2=6.58，P<0.05
表2 恶变组与未恶变组的p53阳性比较
组别
, http://www.100md.com 例数
阳性例数
阳性率%
χ2
P
轻度
恶变组
10
4
40.0
>0.05
未恶变组
8
, 百拇医药
1
12.5
中+重度
恶变组
30
16
53.3
4.55
<0.05
未恶变组
15
3
20.0
, 百拇医药
喉癌中的p53阳性率为51.8%(29/56)，与不典型增生未恶变组间的p53表达差异显著(χ2=7.93，P<0.01)，与恶变组间的表达差异无统计学意义。
喉癌中H-ras阳性率为73.2%(41/56)，与恶变组和未恶变组间均存在统计学差异。正常组织中p53、H-ras染色阴性。(喉正常组织H-ras染色见图3)。
图3 正常喉粘膜上皮H-ras阴性染色(ABC免疫组化染色.×200)
p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生和癌中的表达均无协同现象，与异型增生程度无关。
3 讨论
, 百拇医药
p53蛋白由位于人染色体17P13.1上的p53基因所编码，按其性质和功能的不同有野生型和突变型之分。正常情况下为野生型，属肿瘤抑制因子。突变型p53蛋白乃p53基因发生突变后编码的产物，它失去野生型的功能，可能通过结合野生型p53蛋白或获得某种新的功能而具有致癌作用[5]。野生型p53蛋白量少，性质不稳定，半衰期仅6～20分钟，通常情况下检测不出。突变型p53蛋白性质稳定，半衰期明显延长，可采用免疫组化法检测，故p53蛋白检测阳性，即意味着p53基因已有突变。
为观察p53蛋白过度表达在预后不同的喉粘膜上皮异型增生中有无不同，笔者将有完整随访资料的喉粘膜上皮异型增生按预后分为恶变组和未恶变组。结果发现：p53蛋白过度表达在喉粘膜上皮异型增生恶变组中为50.0%，未恶变组中仅17.4%，两者间表达差异有统计学意义。恶变组的轻、中、重度异型增生，其p53蛋白阳性率分别为40%、60%、40%，较未恶变组轻、中、重度异型增生的12.5%、20.0%、20.0%的阳性率明显为高，两组之间中+重度异型增生的p53蛋白阳性率差异有统计学意义。提示：p53蛋白过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。p53蛋白检测，可对喉粘膜上皮异型增生的发展趋势及预后进行有价值的判断，有利于临床采取正确的处理措施。
, 百拇医药
本研究中，恶变组喉粘膜上皮异型增生的p53蛋白阳性表达与喉癌中的基本一致，这与Dolcetti[1]等的研究结果类似。提示：在分子生物学方面，此类喉粘膜上皮异型增生可能已具有了“癌的特性”。临床应予以高度重视，密切随访，以利喉癌的早期诊断。
癌基因H-ras的编码产物为一种分子量为21000的蛋白质。正常情况下，H-ras蛋白量极少，位于细胞质膜内面，参与控制细胞生长的细胞外信号的传导。当H-ras基因发生扩增或点突变后，产生过多或异常的H-ras蛋白。该蛋白可使GTPase活性降低，致GTP降解成GDP的速率大大减慢，因而始终保持活化状态，持续地激活靶分子，使细胞持续增殖，从而导致癌的形成[6]。
本研究结果，H-ras蛋白表达率在喉癌中为73.2%，与国外文献报道类似[2]。喉粘膜上皮异型增生恶变组和未恶变组的Hras蛋白表达分别为52.5%和52.2%，两组之间同等增生程度间的异型增生，其H-ras蛋白表达差异亦无统计学意义，结果提示：H-ras蛋白表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无明显关系。
, http://www.100md.com
Parada[7]等曾在实验中观察到，p53需ras协同作用方能使鼠胚胎成纤维细胞发生转化。本研究显示，在喉粘膜上皮异型增生和鳞癌中，p53与H-ras蛋白表达无协同现象。
参考文献
[1]Dolcetti R, Doglion C, Mastro R, et al. P53 ovexpression is an early event in the development of human squamous cell carcinoma of the larynx: Genetic and prognostic implication. Int J Cancer, 1992, 52:178
[2]Scambia G, Catozzi L, Panici PB, et al. Expression of ras oncogene p21 protein in normal and neoplastic laryngeal tissues correlation with histopathological features and epidermal growth factor receptors. Br J Cancer, 1994, 69:995
, 百拇医药
[3]Elo JZ, Balatoni ZS, Varga L, et al. Inverstigation of premalignant lesions of larynx epithelium with histoautoradiography and HPV Assay. Acta Otolaryngol, 1993, 113:459
[4]Pendleton N, Dixon GR, Burnett HE, et al. Expression of proliferating cell nuclear antiger (PCNA) in dysplasia of the bronchial epithelium. J Pathol, 1993, 170:169
[5]Halevy H, Michclovia D, Oven. Different tumor derivied p53 mutations exhibit distinct biological activities. Science, 1990, 250:113
, 百拇医药
[6]Mcgrath JP, Capon DJ, Goeddel DV, et al. Comparative biochemical properties of normal and activitied human ras p21 protein. Nature, 1984, 310:644
[7]Parada LF, Land H, Weinberg RA, et al. Cooperation between gene encoding p53 tumor antigen and ras in cellular transformation. Nature, 1984, 312:649
(收稿：1997-10-20修回：1998-12-04), http://www.100md.com
单位：100037 北京，解放军第三○四医院
关键词：烧伤；表皮细胞生长因子；肿瘤坏死因子；一氧化氮
New Page 2
【摘要】目的：探讨喉粘膜上皮异型增生p53、H-ras过度表达与预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法对63例喉粘膜上皮异型增生(经随访其中40例恶变为癌)、56例喉鳞癌和7例喉正常组织进行检测。结果：p53蛋白阳性率在喉粘膜上皮异型增生恶变组为50.0%，未恶变组为17.4%，喉癌组为51.8%，正常组织无表达。恶变组与未恶变组间，未恶变组与喉癌组间的p53蛋白表达差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01)。H-ras蛋白阳性率在喉正常组织、异型增生恶变组、未恶变组、喉癌组依次为0%、52.5%、52.2%和73.2%。恶变组和未恶变组间H-ras表达差异无统计学意义。结论：p53蛋白的过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。H-ras的表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无关。
, 百拇医药
中图号：R739.65
The relationship between the overexpression of p53, H-ras
and the prognosis of laryngeal dysplasia
Xiang Mingliang1 Wu Yunfang1 Shi Daren2, et al
1.EENT Hospital, shanghai Medical University (Shanghai, 200031)
2.Tumor Hospital, Shanghai Medical University (Shanghai, 200032)
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: In order to determine whether prognosis of laryngeal dysplasia is related to expression of p53, H-ras. Method: The avidin biotin peroxidase method was used to detect the p53, H-ras protein in 63 cases of dysplasia (40 cases of whom developed into cancer after 4 years follow-up.), 56 squasmous cell carcinoma and 7 normal tissues. All samples were from larynx. Results: The results showed that the positive p53 staining rates was 50% in the malignant change group, 17.4% in the nonmalignant group, and 51.8% in cancer. No protein was found in normal tissues. The statistical significance was positive between the malignant change group and the nonmalignant group. The positive H-ras staining rates were 0% , 52.5% , 52.2% and 73.2% in nomal tissues, malignant change group, nonmalignant one and cancer, respectivly. There was no statistical difference between the malignant change group of dysplasia and the nonmalignant one. Conclusion: The study results indicate that the overexpression of p53 protein was closely related to the prognosis of laryngeal dysplasia.
, 百拇医药
Key words: p53 protein; Immunohistochemistry; Laryngeal mucosa Epithelium dysplasis; Prognosis
喉粘膜上皮异型增生为喉癌前病变，其中一部分最终发展为喉癌。然预后不同的喉粘膜上皮异型增生，在病理形态学上并无明显差异，若能客观准确地预测其预后，将可明显提高喉癌的早期诊断。
p53为一种抑癌基因，它的突变与许多肿瘤有关，在喉粘膜上皮异型增生和喉癌中亦可检测到其蛋白产物[1]。H-ras为常见的癌基因，与喉癌的发生可能有关[2]。国内外迄今尚未见到有关p53、H-ras与喉粘膜上皮异型增生预后关系的文献。
本研究采用免疫组化法检测p53、H-ras蛋白在喉粘膜上皮异型增生和癌组织中的表达水平，旨在探讨该二因子判断喉粘膜上皮异型增生预后的价值。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1材料
全部组织选自我院病理科1986年～1995年活检或手术标本组织蜡块。喉粘膜上皮异型增生的程度划分标准参照文献[3，4]所述，轻度：异型增生细胞局限于上皮层下1/3范围；中度：异型增生细胞局限于上皮层下2/3范围；重度：异型增生细胞已超过上皮层2/3范围，接近全层。按随访资料将喉粘膜上皮异型增生63例分为恶变组和未恶变组。恶变组标本系随访4年内发展为癌者，未恶变组标本为随访4年以上尚未恶变者。恶变组40例，含轻度粘膜上皮异型增生10例，中度异型增生20例，重度异型增生10例。未恶变组23例，含轻度异型增生8例，中度异型增生10例，重度异型增生5例。
喉鳞癌56例，按1987年UICC标准，Ⅰ期15例，Ⅱ期13例，Ⅲ期12例，Ⅳ期16例。组织病理学分级：Ⅰ级20例，Ⅱ级29例，Ⅲ+Ⅳ级7例。另取7例喉正常组织做对照。以上标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋，病理确诊。
, 百拇医药
1.2检测方法
采用免疫组化ABC法染色。行p53蛋白检测的切片在上一抗前行微波处理。p53McAbDo-7和C-Ha-rasp21McAbNcc-ras-001均为丹麦DaKo公司产品，工作浓度分别为1∶50和1∶100。生物素化马抗鼠抗体及ABCKit为美国Vector公司产品。用已知阳性的喉鳞癌切片做阳性对照，TBS缓冲液替代一抗做空白对照。
1.3结果判断及统计方法
在不知道临床和病理资料的情况下，由两位有经验的病理医师分别观察结果。阳性细胞数<20个为(-)，占肿瘤细胞2%～24%为(+)，25%～50%为(++)，>50%为(+++)。
统计处理采用Epi Info Version5.0统计软件，方法为卡方检验。
2 结果
, 百拇医药
喉粘膜上皮异型增生和鳞癌中，p53阳性细胞为：胞核染成棕黄色，胞浆及胞膜不着色(见图1)。H-ras蛋白阳性细胞为：胞浆和胞膜染成棕黄色，胞核不着色(见图2)。
图1 部分异型增生上皮细胞p53核阳性(ABC免疫组化法.×400)
图2 异型增生上皮胞浆H-ras阳性染色(ABC免疫组化法.×100)
p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生中的阳性表达见表1。恶变组与未恶变组之间的阳性差异见表2。
, 百拇医药
表1 p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生中的阳性表达
组别
例数
p53阳性*
H-ras阳性
例数
%
例数
%
恶变组
40
20
, 百拇医药 50.0
21
52.5
未恶变组
23
4
17.4
12
52.2
*χ2=6.58，P<0.05
表2 恶变组与未恶变组的p53阳性比较
组别
, http://www.100md.com 例数
阳性例数
阳性率%
χ2
P
轻度
恶变组
10
4
40.0
>0.05
未恶变组
8
, 百拇医药
1
12.5
中+重度
恶变组
30
16
53.3
4.55
<0.05
未恶变组
15
3
20.0
, 百拇医药
喉癌中的p53阳性率为51.8%(29/56)，与不典型增生未恶变组间的p53表达差异显著(χ2=7.93，P<0.01)，与恶变组间的表达差异无统计学意义。
喉癌中H-ras阳性率为73.2%(41/56)，与恶变组和未恶变组间均存在统计学差异。正常组织中p53、H-ras染色阴性。(喉正常组织H-ras染色见图3)。
图3 正常喉粘膜上皮H-ras阴性染色(ABC免疫组化染色.×200)
p53、H-ras在喉粘膜上皮异型增生和癌中的表达均无协同现象，与异型增生程度无关。
3 讨论
, 百拇医药
p53蛋白由位于人染色体17P13.1上的p53基因所编码，按其性质和功能的不同有野生型和突变型之分。正常情况下为野生型，属肿瘤抑制因子。突变型p53蛋白乃p53基因发生突变后编码的产物，它失去野生型的功能，可能通过结合野生型p53蛋白或获得某种新的功能而具有致癌作用[5]。野生型p53蛋白量少，性质不稳定，半衰期仅6～20分钟，通常情况下检测不出。突变型p53蛋白性质稳定，半衰期明显延长，可采用免疫组化法检测，故p53蛋白检测阳性，即意味着p53基因已有突变。
为观察p53蛋白过度表达在预后不同的喉粘膜上皮异型增生中有无不同，笔者将有完整随访资料的喉粘膜上皮异型增生按预后分为恶变组和未恶变组。结果发现：p53蛋白过度表达在喉粘膜上皮异型增生恶变组中为50.0%，未恶变组中仅17.4%，两者间表达差异有统计学意义。恶变组的轻、中、重度异型增生，其p53蛋白阳性率分别为40%、60%、40%，较未恶变组轻、中、重度异型增生的12.5%、20.0%、20.0%的阳性率明显为高，两组之间中+重度异型增生的p53蛋白阳性率差异有统计学意义。提示：p53蛋白过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。p53蛋白检测，可对喉粘膜上皮异型增生的发展趋势及预后进行有价值的判断，有利于临床采取正确的处理措施。
, 百拇医药
本研究中，恶变组喉粘膜上皮异型增生的p53蛋白阳性表达与喉癌中的基本一致，这与Dolcetti[1]等的研究结果类似。提示：在分子生物学方面，此类喉粘膜上皮异型增生可能已具有了“癌的特性”。临床应予以高度重视，密切随访，以利喉癌的早期诊断。
癌基因H-ras的编码产物为一种分子量为21000的蛋白质。正常情况下，H-ras蛋白量极少，位于细胞质膜内面，参与控制细胞生长的细胞外信号的传导。当H-ras基因发生扩增或点突变后，产生过多或异常的H-ras蛋白。该蛋白可使GTPase活性降低，致GTP降解成GDP的速率大大减慢，因而始终保持活化状态，持续地激活靶分子，使细胞持续增殖，从而导致癌的形成[6]。
本研究结果，H-ras蛋白表达率在喉癌中为73.2%，与国外文献报道类似[2]。喉粘膜上皮异型增生恶变组和未恶变组的Hras蛋白表达分别为52.5%和52.2%，两组之间同等增生程度间的异型增生，其H-ras蛋白表达差异亦无统计学意义，结果提示：H-ras蛋白表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无明显关系。
, http://www.100md.com
Parada[7]等曾在实验中观察到，p53需ras协同作用方能使鼠胚胎成纤维细胞发生转化。本研究显示，在喉粘膜上皮异型增生和鳞癌中，p53与H-ras蛋白表达无协同现象。
参考文献
[1]Dolcetti R, Doglion C, Mastro R, et al. P53 ovexpression is an early event in the development of human squamous cell carcinoma of the larynx: Genetic and prognostic implication. Int J Cancer, 1992, 52:178
[2]Scambia G, Catozzi L, Panici PB, et al. Expression of ras oncogene p21 protein in normal and neoplastic laryngeal tissues correlation with histopathological features and epidermal growth factor receptors. Br J Cancer, 1994, 69:995
, 百拇医药
[3]Elo JZ, Balatoni ZS, Varga L, et al. Inverstigation of premalignant lesions of larynx epithelium with histoautoradiography and HPV Assay. Acta Otolaryngol, 1993, 113:459
[4]Pendleton N, Dixon GR, Burnett HE, et al. Expression of proliferating cell nuclear antiger (PCNA) in dysplasia of the bronchial epithelium. J Pathol, 1993, 170:169
[5]Halevy H, Michclovia D, Oven. Different tumor derivied p53 mutations exhibit distinct biological activities. Science, 1990, 250:113
, 百拇医药
[6]Mcgrath JP, Capon DJ, Goeddel DV, et al. Comparative biochemical properties of normal and activitied human ras p21 protein. Nature, 1984, 310:644
[7]Parada LF, Land H, Weinberg RA, et al. Cooperation between gene encoding p53 tumor antigen and ras in cellular transformation. Nature, 1984, 312:649
(收稿：1997-10-20修回：1998-12-04), http://www.100md.com